Kif tiddetermina l-aħjar konċentrazzjoni?
Għall-induttur IPTG (isopropyl-beta-d-thiogalactoside), iktar ma tkun għolja l-konċentrazzjoni, aħjar.L-aħjar konċentrazzjoni tiddependi fuq il-kundizzjonijiet sperimentali speċifiċi u l-effett ta 'induzzjoni mixtieq.
Ġeneralment, il-konċentrazzjoni ta 'IPTG tintuża fil-medda ta' 0.1-1 mM.Konċentrazzjonijiet aktar baxxi jistgħu jnaqqsu l-effetti avversi fuq it-tkabbir taċ-ċelluli u jistgħu jnaqqsu ċ-ċitotossiċità minħabba l-espressjoni żejda tal-proteini fil-mira.Konċentrazzjonijiet ogħla jistgħu jikkawżaw piż metaboliku eċċessiv taċ-ċelluli, li jaffettwaw it-tkabbir taċ-ċelluli u l-effiċjenza tal-espressjoni.
Il-mod biex tiġi ddeterminata l-konċentrazzjoni ottimali jista 'jkun li jiġi evalwat il-livell ta' espressjoni tal-proteina fil-mira billi twettaq testijiet ta 'induzzjoni IPTG f'konċentrazzjonijiet differenti.Testijiet ta’ kultura fuq skala żgħira jistgħu jsiru bl-użu ta’ firxa ta’ konċentrazzjonijiet IPTG (eż. 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, eċċ.) u l-effett tal-espressjoni f’konċentrazzjonijiet differenti jista’ jiġi evalwat billi jiġi identifikat il-livell ta’ espressjoni tal-proteina fil-mira (eż. Western skoperta blot jew fluworexxenza).Skont ir-riżultati sperimentali, il-konċentrazzjoni bl-aħjar effett ta 'espressjoni ġiet magħżula bħala l-aħjar konċentrazzjoni.
Barra minn hekk, tista 'wkoll tirreferi għal-letteratura rilevanti jew l-esperjenza ta' laboratorji oħra biex tifhem il-firxa ta 'konċentrazzjoni IPTG użata b'mod komuni taħt kundizzjonijiet sperimentali simili, u mbagħad tottimizza u taġġusta skont il-ħtiġijiet sperimentali.
Huwa importanti li wieħed jinnota li l-konċentrazzjoni ottimali tista 'tvarja skont sistemi ta' espressjoni differenti, proteini fil-mira, u kundizzjonijiet sperimentali, għalhekk huwa aħjar li tottimizza fuq bażi ta 'każ b'każ.
Ħin tal-post: Settembru-28-2023