4-Nitrofenil beta-D-galattopiranożidu CAS:200422-18-0

Effett: L-ONPG huwa sottostrat użat speċifikament biex jidentifika l-preżenza u l-attività tal-enzima β-galactosidase. Meta l-enzima β-galactosidase tkun preżenti u attiva, din taqsam l-ONPG f'żewġ prodotti: o-nitrofenol u derivattiv tal-galattożju. Il-liberazzjoni tal-o-nitrofenol tirriżulta f'bidla fil-kulur isfar, li tista' titkejjel bl-użu ta' spettrofotometru.

Applikazzjoni: L-ONPG għandu diversi applikazzjonijiet fir-riċerka tal-bijoloġija molekulari u l-bijokimika:

Determinazzjoni tal-attività tal-β-galactosidase: L-ONPG jintuża komunement biex ikejjel u jikkwantifika l-attività tal-enzima β-galactosidase. Ir-rata tal-formazzjoni tal-o-nitrofenol, li hija direttament proporzjonali għall-attività tal-enzima, tista' titkejjel b'mod spettrofotometriku.

Espressjoni u regolazzjoni tal-ġeni: L-ONPG spiss jintuża f'esperimenti relatati mal-espressjoni tal-ġeni u studji dwar ir-regolazzjoni. Jintuża ta' spiss f'analiżi tal-proteini tal-fużjoni, bħas-sistema ta' fużjoni lacZ użata b'mod komuni, biex jiġi studjat l-espressjoni tal-ġeni taħt il-kontroll ta' promoturi speċifiċi. L-attività tal-beta-galactosidase mkejla bl-użu tal-ONPG tipprovdi għarfien dwar il-livell ta' espressjoni tal-ġeni.

Skrining għall-attività ta' β-galactosidase: L-ONPG jista' jintuża bħala metodu ta' skrining kolorimetriku fit-teknoloġija tad-DNA rikombinanti biex jidentifika l-preżenza u l-funzjonalità tal-ġene LacZ, li jikkodifika l-β-galactosidase. Dan il-metodu ta' skrining jgħin fl-identifikazzjoni ta' kloni li fihom il-ġene ta' interess.

Studji tal-kinetika tal-enżimi: L-ONPG huwa wkoll utli fl-istudju tal-kinetika tal-enżima β-galactosidase. Billi titkejjel ir-rata tar-reazzjoni bejn l-enżima u s-sottostrat f'konċentrazzjonijiet differenti ta' sottostrat, huwa possibbli li jiġu determinati parametri kinetiċi bħal kostanti ta' Michaelis-Menten (Km) u rati massimi ta' reazzjoni (Vmax).