Hemm ħafna eroj mhux ikkantati madwarna, li jidhru li huma ordinarji, iżda fil-fatt fis-skiet jikkontribwixxu ħafna għalina.Proteinase K hija l-"eroj mhux ikkontestat" fl-industrija tad-dijanjostika molekulari, għalkemm meta mqabbla mal-"kbar u qawwija" fl-industrija, proteinase K hija tant baxxa li ilna injorat l-importanza tagħha.Bit-tifqigħa tal-epidemija tal-kuruna l-ġdida, id-domanda għal proteinase K żdiedet, u l-provvista fid-dar u barra hija ferm lura mill-konsum, u kulħadd f'daqqa induna li proteinase K hija tant importanti.
X'inhu l-użu ta' proteinase K?
Proteinase K hija serine protease b'attività ta 'enżima proteolitika u tista' żżomm attività f'firxa wiesgħa ta 'ambjenti (pH (4-12.5), buffer b'ħafna melħ, temperatura għolja ta' 70 ° C, eċċ.).Barra minn hekk, l-attività ta 'proteinażi K mhix inibita minn SDS, urea, EDTA, guanidine hydrochloride, guanidine isothiocyanate, eċċ., U ċertu ammont ta' deterġent jista 'wkoll itejjeb l-attività ta' proteinase K. Fit-trattament mediku (virus u diżinfezzjoni mikrobjali ), ikel (tenerizzazzjoni tal-laħam), ġilda (trattib tax-xagħar), produzzjoni ta 'l-inbid (kjarifika ta' l-alkoħol), preparazzjoni ta 'aċidu amminiku (rix degradat), estrazzjoni ta' aċidu nuklejku, ibridizzazzjoni in situ, eċċ., proteinase K Hemm applikazzjonijiet.L-applikazzjoni l-aktar użata hija l-estrazzjoni ta 'aċidu nuklejku.
Proteinase K jista 'enzymolyze kull tip ta' proteini fil-kampjun, inklużi dawk histones li huma marbuta sewwa ma 'aċidi nuklejċi, sabiex l-aċidi nuklejċi jistgħu jiġu rilaxxati mill-kampjun u rilaxxati fl-estratt, li jiffaċilita l-pass li jmiss ta 'estrazzjoni u purifikazzjoni.Fl-iskoperta ta 'aċidu nuklejku virali, proteinase K hija waħda mill-komponenti importanti fis-soluzzjoni ta' kampjunar tal-virus.Proteinase K jista 'jinqasam u jinattiva l-proteina tal-kisja tal-virus, li hija aktar sigura matul l-istadju tat-trasport u l-iskoperta;barra minn hekk, proteinase K jista 'wkoll jiddegrada RNase jipprevjeni d-degradazzjoni ta' RNA virali u jiffaċilita l-iskoperta ta 'aċidu nuklejku.
Il-fama matul il-lejl tal-proteinażi K
Kemm jekk fil-qasam tar-riċerka xjentifika jew fil-qasam tal-IVD, l-estrazzjoni tal-aċidu nuklejku hija l-aktar esperiment bażiku, għalhekk proteinase K dejjem kienet eżistenza importanti ħafna.Madankollu, fil-passat, proteinase K kienet ferm inqas magħrufa mir-rwol tagħha.Parti kbira minn dan kien minħabba li r-relazzjoni tal-provvista u d-domanda tal-proteinażi K kienet stabbli ħafna.Ftit nies jaħsbu li l-provvista ta 'proteinażi K tkun problema.
Bit-tifqigħa tal-epidemija tal-kuruna l-ġdida, id-domanda għall-ittestjar tal-aċidu nuklejku żdiedet.Sa l-aħħar ta 'Ġunju 2020, iċ-Ċina lestiet kważi 90 miljun test tal-kuruna ġdid, u dan in-numru huwa saħansitra aktar allarmanti fuq skala globali.F'esperimenti ta 'estrazzjoni ta' aċidu nuklejku, il-konċentrazzjoni tax-xogħol ta 'proteinażi K hija madwar 50-200 μg/mL.Ġeneralment, tieħu madwar 100 μg ta 'proteinażi K biex jiġi estratt kampjun ta' aċidu nuklejku.Fl-użu attwali, sabiex tiżdied l-effiċjenza tal-estrazzjoni tal-aċidu nuklejku, ħafna drabi Proteinase K se tintuża f'ammont akbar.L-iskoperta ta 'aċidu nuklejku tal-koronavirus il-ġdid ġabet ammont kbir ta' domanda għall-proteinażi K.Il-bilanċ oriġinali tal-provvista u d-domanda tal-proteinażi K inkiser malajr, u l-proteinażi K saret materjal importanti għall-prevenzjoni tal-epidemija matul il-lejl.
Diffikultajiet fil-produzzjoni tal-proteinażi K
Għalkemm bl-iżvilupp ta 'l-epidemija, il-valur importanti ta' proteinase K ġie vvalutat min-nies, huwa imbarazzanti li minħabba l-low-key eċċessiv ta 'proteinase K, ftit kumpaniji domestiċi kienu involuti fil-produzzjoni ta' proteinase K. Meta n-nies trid tistabbilixxi l-produzzjoni tal-proteinażi K Matul il-proċess tal-produzzjoni, ġie skopert li l-proteinażi K hija proteina estremament speċjali.Huwa estremament ta 'sfida li tespandi l-kapaċità tal-produzzjoni ta' proteinase K f'perjodu qasir ta 'żmien.
Il-produzzjoni fuq skala kbira ta 'proteinażi K tiffaċċja d-diffikultajiet li ġejjin
1. Espressjoni baxxa
Proteinase K jista' jiddegrada b'mod mhux speċifiku l-biċċa l-kbira tal-proteini u jikkawża tossiċità serja għaċ-ċellula ospitanti tal-espressjoni.Għalhekk, il-livell ta 'espressjoni ta' proteinase K huwa ġeneralment baxx ħafna.L-iskrinjar ta' sistemi ta' espressjoni u razez li jesprimu ħafna proteinase K ġeneralment jeħtieġ ċiklu itwal.
2. Residwi ta 'pigmenti u aċidi nuklejċi
Fermentazzjoni fuq skala kbira tintroduċi ammont kbir ta 'pigment u residwi ta' aċidu nuklejku ospitanti.Huwa diffiċli li jitneħħew dawn l-impuritajiet bi proċess ta 'purifikazzjoni sempliċi, u purifikazzjoni kumplessa żżid l-ispiża u tnaqqas ir-rata ta' rkupru.
3. Instabilità
Proteinase K mhix stabbli biżżejjed, tista 'enzymolyze innifsu, u huwa diffiċli li taħżen b'mod stabbli f'37 ° C għal żmien twil mingħajr aġent protettiv.
4. Faċli biex tippreċipita
Meta tħejji t-trab imnixxef bil-friża tal-proteinażi K, sabiex jiġi żgurat li l-kontenut solidu tal-proteinażi K fit-trab imnixxef bil-friża jkun kbir, huwa meħtieġ li jiżdied aġent protettiv imnixxef bil-friża f'konċentrazzjoni għolja, iżda meta l- konċentrazzjoni ta 'proteinażi K tilħaq 20mg / mL u 'l fuq, huwa faċli L-aggregazzjoni tifforma preċipitat, li ġġib diffikultajiet kbar għat-tnixxif bil-friża ta' proteinase K b'kontenut solidu għoli.
5. Investiment kbir
Proteinase K għandha attività ta 'protease qawwija u tista' idrolizza proteases oħra fil-laboratorju.Għalhekk, proteinase K teħtieġ żoni ta 'produzzjoni speċjalizzati, tagħmir u persunal għar-riċerka u l-iżvilupp u l-produzzjoni.
Soluzzjoni ta' proteinase K ta' XD BIOCHEM
XD BIOCHEM għandha pjattaforma ta 'espressjoni u purifikazzjoni ta' proteina matura, u għandha esperjenza rikka fl-espressjoni u l-purifikazzjoni ta 'proteini rikombinanti u l-ottimizzazzjoni tal-proċessi ta' produzzjoni.Permezz tal-formazzjoni rapida ta 'tim ta' riċerka u żvilupp, il-proċess ta 'produzzjoni fuq skala kbira ta' proteinase K ġie megħlub.Il-produzzjoni ta 'kull xahar ta' trab imnixxef bil-friża hija aktar minn 30 KG.Il-prodott għandu prestazzjoni stabbli, attività speċifika ta 'enzima għolja, u l-ebda residwi ta' ċitokromu ospitanti u aċidu nuklejku.Merħba tikkuntattja lil XD BIOCHEM Ikseb pakkett ta' prova (E-mail:sales@xdbiochem.comTel: +86 513 81163739).
Is-soluzzjonijiet tekniċi ta 'XD BIOCHEM jinkludu
Bl-użu ta 'integrazzjoni ta' plasmidi b'ħafna kopji, jintgħażlu razez ta 'espressjoni għolja b'livell ta' espressjoni ta '8g / L, li jegħleb il-problema ta' livell baxx ta 'espressjoni ta' proteinase K.
Permezz tat-twaqqif ta 'proċess ta' purifikazzjoni f'diversi stadji, iċ-ċitokromu ospitanti u residwi ta 'aċidu nuklejku ta' proteinase K tneħħew b'suċċess taħt il-valur standard.
Permezz ta 'screening ta' produzzjoni għolja ta 'formulazzjonijiet ta' buffer protettiv, intgħażlet buffer li jista 'jaħżen b'mod stabbli proteinase K f'37 °C.
Screening buffers jegħleb il-problema li proteinase K hija faċli biex tiġbor u tippreċipita f'konċentrazzjonijiet għoljin, u tistabbilixxi l-pedament għat-tnixxif bil-friża ta 'kontenut għoli ta' solidu ta 'proteinażi K.
XD BIOCHEM proteinase K kampjun
XD BIOCHEM proteinase K test ta' stabbiltà: mhux se jkun hemm bidla sinifikanti fl-attività wara 80 d f'temperatura tal-kamra
XD BIOCHEM proteinase K test ta' stabbiltà: mhux se jkun hemm bidla sinifikanti fl-attività wara 80 d f'temperatura tal-kamra.
Tqabbil tal-effett tal-estrazzjoni tal-aċidu nuklejku ta 'XD BIOCHEM proteinase K u prodotti li jikkompetu.Fil-proċess ta 'estrazzjoni ta' aċidu nuklejku, jintużaw XD BIOCHEM u proteinase K kompetittiva rispettivament.L-effiċjenza ta 'estrazzjoni ta' XD BIOCHEM proteinase K hija ogħla u l-valur Ct tal-ġene fil-mira huwa aktar baxx.
Ħin tal-post: Diċ-31-2021