Hemm ħafna eroj mhux magħrufa madwarna, li jidhru ordinarji, iżda fil-fatt jikkontribwixxu ħafna għalina fis-skiet. Il-Proteinase K hija l-"eroj mhux magħrufa" fl-industrija tad-dijanjostika molekulari, għalkemm meta mqabbla mal-"kbar u qawwija" fl-industrija, il-proteinase K hija tant kwieta li ilna ninjoraw l-importanza tagħha. Bit-tifqigħa tal-epidemija l-ġdida tal-kuruna, id-domanda għall-proteinase K żdiedet, u l-provvista f'pajjiżna u barra minn pajjiżna hija ferm lura mill-konsum, u kulħadd f'daqqa waħda induna li l-proteinase K hija tant importanti.
X'inhu l-użu tal-proteinażi K?
Proteinase K hija serine protease b'attività ta' enzimi proteolitiċi u tista' żżomm l-attività f'firxa wiesgħa ta' ambjenti (pH (4-12.5), buffer b'ħafna melħ, temperatura għolja ta' 70°C, eċċ.). Barra minn hekk, l-attività ta' proteinase K mhijiex inibita minn SDS, urea, EDTA, guanidine hydrochloride, guanidine isothiocyanate, eċċ., u ċertu ammont ta' deterġent jista' wkoll itejjeb l-attività ta' proteinase K. Fit-trattament mediku (diżinfezzjoni tal-virus u mikrobjali), ikel (rattab tal-laħam), ġilda (rattab tax-xagħar), produzzjoni tal-inbid (kjarifika tal-alkoħol), preparazzjoni ta' amino acids (rix degradat), estrazzjoni ta' aċidu nuklejku, ibridizzazzjoni in situ, eċċ., proteinase K għandha applikazzjonijiet. L-aktar applikazzjoni użata komunement hija l-estrazzjoni ta' aċidu nuklejku.
Proteinase K tista' tenzimolizza kull tip ta' proteini fil-kampjun, inklużi dawk l-istoni li huma marbuta sew ma' aċidi nuklejċi, sabiex l-aċidi nuklejċi jkunu jistgħu jiġu rilaxxati mill-kampjun u rilaxxati fl-estratt, u b'hekk jiffaċilitaw il-pass li jmiss ta' estrazzjoni u purifikazzjoni. Fl-iskoperta ta' aċidu nuklejku virali, proteinase K hija waħda mill-komponenti importanti fis-soluzzjoni tal-kampjunar tal-virus. Proteinase K tista' tkisser u tiddiżattiva l-proteina tal-kisi tal-virus, li hija aktar sikura matul l-istadju tat-trasport u l-iskoperta; barra minn hekk, proteinase K tista' wkoll tiddegrada RNase, tipprevjeni d-degradazzjoni tal-RNA virali u tiffaċilita l-iskoperta tal-aċidu nuklejku.
Il-fama matul il-lejl tal-proteinase K
Kemm jekk fil-qasam tar-riċerka xjentifika kif ukoll fil-qasam tal-IVD, l-estrazzjoni tal-aċidu nuklejku hija l-aktar esperiment bażiku, għalhekk il-proteinase K dejjem kienet eżistenza importanti ħafna. Madankollu, fil-passat, il-proteinase K kienet ħafna inqas magħrufa mir-rwol tagħha. Parti kbira minn dan kienet minħabba li r-relazzjoni bejn il-provvista u d-domanda tal-proteinase K kienet stabbli ħafna. Ftit nies jaħsbu li l-provvista tal-proteinase K tkun problema.
Bit-tifqigħa tal-epidemija l-ġdida tal-kuruna, id-domanda għall-ittestjar tal-aċidu nuklejku żdiedet. Mill-aħħar ta' Ġunju 2020, iċ-Ċina lestiet kważi 90 miljun test ġdid tal-kuruna, u dan in-numru huwa saħansitra aktar allarmanti fuq skala globali. Fl-esperimenti tal-estrazzjoni tal-aċidu nuklejku, il-konċentrazzjoni tax-xogħol tal-proteinase K hija ta' madwar 50-200 μg/mL. Ġeneralment, jieħu madwar 100 μg ta' proteinase K biex jiġi estratt kampjun ta' aċidu nuklejku. Fl-użu attwali, sabiex tiżdied l-effiċjenza tal-estrazzjoni tal-aċidu nuklejku, ħafna drabi l-Proteinase K tintuża f'ammont akbar. L-iskoperta tal-aċidu nuklejku tal-coronavirus il-ġdid ġabet magħha ammont kbir ta' domanda għall-proteinase K. Il-bilanċ oriġinali tal-provvista u d-domanda tal-proteinase K inkiser malajr, u l-proteinase K saret materjal importanti għall-prevenzjoni tal-epidemija mil-lum għal għada.
Diffikultajiet fil-produzzjoni ta' proteinase K
Għalkemm bl-iżvilupp tal-epidemija, il-valur importanti tal-proteinase K ġie apprezzat min-nies, huwa imbarazzanti li minħabba n-nuqqas eċċessiv ta' importanza tal-proteinase K, ftit kumpaniji domestiċi kienu involuti fil-produzzjoni tal-proteinase K. Meta n-nies iridu jistabbilixxu l-produzzjoni tal-proteinase K Matul il-proċess tal-produzzjoni, ġie skopert li l-proteinase K hija proteina speċjali ħafna. Huwa estremament ta' sfida li tespandi l-kapaċità tal-produzzjoni tal-proteinase K f'perjodu qasir ta' żmien.
Il-produzzjoni fuq skala kbira ta' proteinase K tiffaċċja d-diffikultajiet li ġejjin
1. Espressjoni baxxa
Il-proteinażi K tista' tiddegrada l-biċċa l-kbira tal-proteini b'mod mhux speċifiku u tikkawża tossiċità serja liċ-ċellula ospitanti tal-espressjoni. Għalhekk, il-livell ta' espressjoni tal-proteinażi K ġeneralment huwa baxx ħafna. L-iskrinjar tas-sistemi ta' espressjoni u r-razez li jesprimu ħafna proteinażi K ġeneralment jeħtieġ ċiklu itwal.
2. Residwi ta' pigmenti u aċidi nuklejċi
Fermentazzjoni fuq skala kbira tintroduċi ammont kbir ta' pigment u residwi ta' aċidu nuklejku ospitanti. Huwa diffiċli li dawn l-impuritajiet jitneħħew bi proċess sempliċi ta' purifikazzjoni, u purifikazzjoni kumplessa żżid l-ispiża u tnaqqas ir-rata ta' rkupru.
3. Instabbiltà
Il-proteinażi K mhijiex stabbli biżżejjed, tista' tiġbor lilha nnifisha fl-enzimi, u huwa diffiċli li tinħażen b'mod stabbli f'37°C għal żmien twil mingħajr aġent protettiv.
4. Faċli biex tippreċipita
Meta tipprepara t-trab imnixxef bil-friża tal-proteinase K, sabiex tiżgura li l-kontenut solidu ta' proteinase K fit-trab imnixxef bil-friża jkun kbir, huwa meħtieġ li jiżdied aġent protettiv imnixxef bil-friża f'konċentrazzjoni għolja, iżda meta l-konċentrazzjoni ta' proteinase K tilħaq 20mg/mL u aktar, huwa faċli li l-aggregazzjoni tifforma preċipitat, li jġib diffikultajiet kbar għat-tnixxif bil-friża tal-proteinase K b'kontenut għoli ta' solidi.
5. Investiment kbir
Il-proteinażi K għandha attività qawwija ta' proteażi u tista' tidrolizza proteasi oħra fil-laboratorju. Għalhekk, il-proteinażi K teħtieġ żoni ta' produzzjoni speċjalizzati, tagħmir, u persunal għar-riċerka u l-iżvilupp u l-produzzjoni.
Soluzzjoni tal-proteinase K ta' XD BIOCHEM
XD BIOCHEM għandha pjattaforma matura għall-espressjoni u l-purifikazzjoni tal-proteini, u għandha esperjenza rikka fl-espressjoni u l-purifikazzjoni ta' proteini rikombinanti u l-ottimizzazzjoni tal-proċessi ta' produzzjoni. Permezz tal-formazzjoni rapida ta' tim ta' riċerka u żvilupp, il-proċess ta' produzzjoni fuq skala kbira ta' proteinase K ġie megħlub. Il-produzzjoni mensili ta' trab imnixxef bil-friża hija aktar minn 30 KG. Il-prodott għandu prestazzjoni stabbli, attività speċifika għolja għall-enzimi, u l-ebda residwi ta' ċitokromu ospitanti u aċidu nuklejku. Merħba biex tikkuntattja lil XD BIOCHEM Ikseb pakkett ta' prova (E-mail:sales@xdbiochem.comTel: +86 513 81163739).
Is-soluzzjonijiet tekniċi ta' XD BIOCHEM jinkludu
Bl-użu tal-integrazzjoni ta' plażmidi b'ħafna kopji, jintgħażlu razez b'espressjoni għolja b'livell ta' espressjoni ta' 8g/L, u dan jegħleb il-problema tal-livell baxx ta' espressjoni ta' proteinase K.
Permezz tal-istabbiliment ta' proċess ta' purifikazzjoni f'diversi stadji, ir-residwi taċ-ċitokromu ospitanti u tal-aċidu nuklejku tal-proteinażi K tneħħew b'suċċess taħt il-valur standard.
Permezz ta' skrinjar b'rendiment għoli ta' formulazzjonijiet ta' buffer protettiv, intgħażel buffer li jista' jaħżen proteinase K b'mod stabbli f'37°C.
Il-buffers tal-iskrinjar jegħlbu l-problema li l-proteinase K hija faċli biex tiġi aggregata u preċipitat f'konċentrazzjonijiet għoljin, u jistabbilixxu l-pedament għat-tnixxif bil-friża b'kontenut għoli ta' solidi tal-proteinase K.
Kampjun tal-proteinażi K XD BIOCHEM
Test tal-istabbiltà tal-proteinase K XD BIOCHEM: ma jkun hemm l-ebda bidla sinifikanti fl-attività wara 80 jum f'temperatura tal-kamra
Test tal-istabbiltà tal-proteinase K XD BIOCHEM: ma jkun hemm l-ebda bidla sinifikanti fl-attività wara 80 jum f'temperatura tal-kamra.
Paragun tal-effett tal-estrazzjoni tal-aċidu nuklejku ta' XD BIOCHEM proteinase K u prodotti kompetittivi. Fil-proċess tal-estrazzjoni tal-aċidu nuklejku, jintużaw XD BIOCHEM u proteinase K kompetittiva rispettivament. L-effiċjenza tal-estrazzjoni ta' XD BIOCHEM proteinase K hija ogħla u l-valur Ct tal-ġene fil-mira huwa aktar baxx.
Ħin tal-posta: 31 ta' Diċembru 2021